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質粒提取與純化 — 我們不一樣 質粒是細菌中獨立于基因組DNA外的小型環狀DNA分子,具有自主復制的能力,并能在子代細胞中維持穩定的拷貝數。質粒能夠攜帶外源基因進入細菌中擴增或者表達,是最常用的外源基因載體,在分子克隆、重組病毒的制備、蛋白表達以及藥物篩選等領域廣泛應用。  生命科學實驗室的“圣經”《分子克隆實驗指南》中關于質粒提取的經典方法有堿裂解法和煮沸法等。傳統的堿裂解法操作時間久,所得質粒量較多且蛋白質等雜質去除徹底,但實驗過程中涉及酚氯仿的使用,不利于操作者的健康;煮沸法操作簡單,時間短,但所得質粒純度和產量均較低。隨著分子生物學技術的發展,出現了很多商品化的質粒提取試劑盒,其中堿裂解法的試劑盒因簡便有效最受歡迎。以堿裂解法為原理發展起來的商業化試劑盒主要有離心柱法和磁珠法兩種,主要區別是采用不同的吸附材料進行質粒的分離。離心柱法利用特殊硅基質膜在不同pH值和鹽離子濃度下對質粒的吸附能力不同而分離出質粒;磁珠法利用超順磁性的硅羥基磁珠在高鹽條件下吸附質粒,低鹽條件下洗脫釋放質粒的特性,分離純化質粒。離心柱法與磁珠法提取質粒優缺點對比超順磁性的硅羥基磁珠具有粒徑小,比表面積大,磁分離速度快等特點,使得磁珠法的質粒提取試劑盒具有核酸吸附量多,分離洗滌更徹底,不需反復離心,既可手工操作也可配合自動化設備等優勢,這也是越來越多的科研人員和工業客戶選擇磁珠法質粒...
發布時間: 2018 - 11 - 20
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